HRP標記抗體的確有一些不便和一些小竅門，但其決不是太神密的事兒。
 

　　你需要掌握你所必須的標記物的特點，挑選適合的帶活性標記物(HRP酶，生物素或是熒光染料)，對活性的標記物要清晰其溶解度(脂溶性或是水溶)、儲存規(guī)定、活性結(jié)構(gòu)域化學變化特點這些。有一些熒光染料有比較嚴苛的規(guī)定，一定要防水，一旦碰到水活性鍵在數(shù)分鐘內(nèi)或幾個小時內(nèi)*降解，脂溶性的染劑一般用DMSO,DMF類溶劑融解，一定要保證其不水分含量。在儲存上全部熒光染料都規(guī)定遮光，應用和反映全過程都需要盡可能遮光?；钚匀緞┑幕钚枣I與抗體的反映官能團務必要清晰，那樣才可以確保給其出示適合的反映標準。
 

　　再度，有關(guān)抗體。抗體的純凈度好些，非特異和溶解度還要好，盡可能不必有轉(zhuǎn)性抗體和沉淀。其融解的水溶液自然環(huán)境是為碳酸鹽(例如PBS自然環(huán)境)，處在一個適合平穩(wěn)的PH自然環(huán)境，水溶液中不帶有游離的可影響反映的官能團異構(gòu)，例如，絕大多數(shù)的活性染劑是與抗體的伯羥基(-NH2)反映，因此水溶液中一定不可以帶有帶伯羥基的化合物，大家提純抗體全過程必須很多應用這種實驗試劑，在中后期通常沒有除去整潔。
 

　　第三，標記反映全過程，標記反映的標準如果合適于標記物化學變化的，而于此同時又不可以損害抗體的活性。針對標記緩沖溶液中一樣不可以有游離官能團或是緩聚劑影響反映；標記溫度和時間還要有效操縱；標記物與抗體的占比要適合，并不是愈多愈好。全部標記反映全過程要遮光，所應用觸碰的全部的器皿槍嘴一定要整潔。
 

　　標記反應完之后，殘留的未標記的標記物、有機溶劑一定要去除干凈(去除干凈的標準同抗體溶液環(huán)境中游離干擾物去除方法)，同時，PH要調(diào)整到抗體適的環(huán)境。必要的時候加入30&左右甘油和保護性的蛋白，分裝成小份-20℃保存。
 

　　注意事項
 

　　1.在具備高質(zhì)量HRP的條件下，所要標記的抗體也要活性高,效價高,純度高，親和力好，這是保證標記物效價高，免疫活性好的首要條件。
 

　　2.所使用試劑的PH和濃度及用量必須嚴格掌握。所用試劑，好(或必需)新鮮配制。如在戊二醛標記法中所用戊二醛應為新鮮純品，因戊二醛儲存過久可形成縮和體(雜質(zhì))。否則，影響標記效果。
 

　　3.室溫攪拌時須避光，室內(nèi)溫度一般在25℃為宜。標記物每次透析前，須認真檢查，防止漏液。
 

　　4.濃的標記物相當穩(wěn)定，常加入30～40%甘油于-10℃下保存。4℃可保存1～2年，但稀釋成1∶10，只能保存數(shù)周。已配制的使用液應在12小時內(nèi)用完。切忌反復凍融。