辣根過氧化物酶（HRP）是一種含亞鐵血紅素的蛋白質(zhì)，廣泛分布于植物界，以在辣根中含量高而得名，分子質(zhì)量約為40KDa。作為酶標記抗體是通過共價鍵經(jīng)適當?shù)姆椒▽⒚嘎?lián)接在抗體上，形成酶標抗體后再通過酶對底物的特異性催化作用，生成有色不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，利用肉眼、光學顯微鏡或電子顯微鏡可對結果進行觀察。

　　

　　HRP由無色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結合而成，該酶的活性中心含鐵卟啉即輔基，在403nm波長處呈現(xiàn)zui高吸收峰，酶蛋白部分吸收波長為275nm，純度為二者的吸光度比值RZ，該酶與抗體標記的方法有多種，根據(jù)酶的結構可分為戊二醛兩步法和過碘酸鈉法兩種方式標記抗體。

　　

　　HRP抗體標記的方法：

　　

　　一、戊二醛兩步標記法

　　

　　戊二醛（GA）是常用的雙功能基團交聯(lián)劑，它的兩個功能基可以與HRP和抗體上的氨基結合，形成HRP-GA-IgG結合物。在兩步法中先將酶與過量的GA反應，形成二者的結合物，然后再將該結合物進一步與抗體蛋白質(zhì)分子的氨基交聯(lián)，形成酶標記抗體。

　　

　　二、簡易過碘酸鈉標記法

　　

　　利用過碘酸鈉將HRP的糖基氧化成醛基，加入抗體IgG后該醛基與IgG氨基結合形成Schiff堿。為了防止HRP中糖的醛基與其自身蛋白氨基發(fā)生偶合，在用過碘酸鈉氧化前先用二硝基氟苯阻斷氨基。氧化反應末了，用硼氫化鈉穩(wěn)定Schiff氏堿。此方法只適用于含糖量較高的酶。